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Comment nettoyer et régénérer une colonne C8 de HPLC

Chromatographie liquide à haute performance (CLHP) est une méthode commune d'analyse de laboratoire dans lequel un échantillon est séparé en ses constituants chimiques est passe à travers une colonne. La colonne est remplie d'un garnissage poreux typiquement à base de gel de silice traitée. Une colonne en phase inverse standard, tel qu'un C8, peut parfois se boucher ou contaminés. Ces colonnes peuvent souvent être régénérées en utilisant quelques techniques simples.

Choses que vous devez

  • Instrument HPLC
  • Eau
  • Méthanol
  • Acétonitrile
  • Isopropanol
  • Le chlorure de méthylène
  • Hexane
  1. La régénération d'une colonne

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      Détachez la colonne encrassé et inverser sa position, de sorte que la phase mobile est maintenant entre dans ce qui est normalement la sortie de la colonne. Fixer une ligne de sortie à l'autre extrémité de la colonne (la fin qui était à l'origine de l'entrée), et exécuter ce dans un conteneur à déchets.

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      Pompe à travers une série de solvants dans un ordre décroissant de polarité. Une série de base recommandé est de commencer avec du methanol, puis de l'acétonitrile progresser à travers, un mélange acétonitrile / isopropanol (75:25), de l'isopropanol, le chlorure de méthylène et d'hexane. Si la phase mobile assis à l'origine dans la colonne était un tampon, un lavage avec de l'eau devrait précéder le méthanol. Un taux de 1 à 2 millilitres par minute d'écoulement est généralement convenable, et environ 10 volumes de colonne de chaque solvant doit être pompé à travers. Le volume de la colonne est de l'espace intérieur non occupé par l'emballage et est calculée comme étant (0,7 x pi x (ID / 2) ^ 2 x L), où ID est le diamètre interne de la colonne et L est sa longueur.

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      Pompe encore 10 volumes de colonne de l'isopropanol à travers la colonne pour le préparer pour une utilisation avec la phase mobile initiale. Si la phase mobile initiale a été tamponnée, également pomper l'eau à travers la colonne après l'isopropanol avant de revenir à la phase mobile tamponnée d'origine.

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      Déconnecter la colonne et inverser et reconnecter sorte qu'il se trouve dans sa configuration normale (à savoir, avec la phase mobile étant pompé dans l'entrée de la colonne). Reconnecter la sortie de la colonne au détecteur.

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